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yshen2010@sinano.ac.cn
广泛用于绝对定量、相对定量、终点法基因分型、溶解曲线法基因分型、DNA甲基化研究、Micro RNA研究、HRM基因扫描等研究。分析模式多样,包括绝对定量、相对定量、基因分型(溶解曲线法和终点法)、高分辨率溶解曲线分析,同时适用几乎所有检测模式(染料检测、水解探针(TaqMan探针)、杂交探针、简单探针等)。可使用市面上绝大多数荧光染料以及第三方提供的8 连管,96孔板和384孔板。
5色激发通道(nm):450,783,523,558,615;6色荧光检测通道(nm):500,533,568,610,640,670
最大升温速度:4.8 ℃/S
最大降温速度:2.5 ℃/S
孔间温度均一性:±0.1 ℃
孔间检测重复性:CV ≤ 0.3%
线性范围:100-1010/孔,样品无需稀释,达到单拷贝基因的水平
高速:40分钟完成40个PCR循环(384孔板)
配有96孔和384孔两种模块
一、打开仪器与软件,放入已加样完毕的孔板。
二、软件设定
设定新实验
1、软件开启后进入主画面。点选“New Experiment”。
2、出现实验设定窗口。
设定实验
(若要套用设定好的实验步骤Template,请跳至6)
1、在实验设定画面上方,先选择适当的Detection Format。另外可再点选Customize勾选所需的滤片组合。
2、输入反应体积:96well plate范围为10-100ul,而384well plate范围为5-20ul。
3、设定实验步骤Program
a)设定Program,包含有Pre-incubation,Amplification(PCR),Melting curve(optional)与Cooling。利用【+】与【—】增加或删除步骤。
b)设定循环数目Cycle与分析模式。通常Amplification(PCR) program设定成【Quantification】,而Melting Curve program设定成【Melting Curve】。
4、设定详细温度变化
a)点选各个program即可设定详细温度变化步骤,请根据产品说明书来设定,利用【+】与【—】增加或删除步骤。需要设定的参数包含Target目标温度,Acquisition Mode,Hold停留时间。Ramp Rate为升降温速度。
若设定温度低于50℃,请把Ramp Rate调整成1.5℃/s(96 well)或2.0℃/s(384 well)。
5、将实验步骤存成【Template】以便下次进行套用。点选左下角“Save As Template”即可把此步骤储存起来。
6、若要进行套用时,直接点选窗口左下角“Apply Template”,选择欲套用之实验步骤即可。
7、设定完成后点选“Start Run”开始进行实验。
8、跳出档案储存窗口,请输入欲储存之文件名称。
三、实验完成后取出孔板,关闭电源键。